蛋白质组定量研究服务 - 外泌体定量蛋白质组
产品概述
外泌体在1980年首次被发现，被认为是活细胞的排泄废物。其径粒约为30-150 nm，广泛散布于各类体液及植物中，受脂质双分子膜的保护，内容物稳定，在丰度和稳定性上有明显的优势，其组成成分主要为蛋白质、核酸、脂质等。它们在分泌细胞和受体细胞之间穿梭介导了细胞间的生物分子传递，是不同组织细胞间信息沟通的重要媒介。
技术特点及优势
1.多种提取方案满足不同需求：超速离心法金标准；TiO2 适合微量样本；
2.全系列表征：NTA，电镜，WB，纳米流式一站式解决；
3.多组学联合分析：全转录组学、蛋白质组学、代谢组学全覆盖、差异筛选；
4.验证无忧：1mL血清外泌体蛋白组学，从差异蛋白筛选到靶向验证。
应用领域
1.细胞外囊泡在体内可促进肿瘤发生，控制转移灶形成和肿瘤免疫反应
2.在心血管疾病方面，可作为心血管系统传递的载体，对心脏重塑、血管形成具有病理作用
3.尿液中的外泌体可作为肾脏疾病的潜在生物标志物，反应从足细胞到肾小管的病理变化
4.在肝脏疾病和神经退行性疾病中也会作为相关疾病蛋白的载体，成为早期诊断的潜在生物标志物
外泌体的分离纯化
外泌体的分离和纯化是外泌体蛋白质组学研究的前提。外泌体的提取方法包括TiO2富集法、超速离心法和试剂盒法等，每种方法各有其优缺点，方法的不同对所提纯的外泌体大小，形态，密集程度等有所影响。
TiO2富集法：外泌体在TiO2表面化学吸附的驱动力是磷脂双分子层上的磷酸基团和TiO2之间的配位键。由于磷脂双分子层的柔韧性，可以弯曲以促进与TiO2表面的多位点相互作用，因此可以实现特定而牢固的结合。由于其简单性和高度的亲和力，这种基于共价结合的选择性富集方法，具有富集效率高，非特异性吸附少，样品处理时间短等方面的优势。
超速离心法：超速离心分离外泌体是目前使用广泛的一种方法，也是目前公认的金标准。其原理是根据外泌体与细胞不同组分的沉降系数不同，利用不同强度离心力使样品中死亡细胞、细胞碎片、细胞器等组分被分离出去，然后获得外泌体及部分受到污染的蛋白，用PBS再次重悬清洗离心后即可获得实验所需外泌体。超速离心的优点是能够大量处理样本，且与其他方法相比提取的外泌体形态及后续的外泌体鉴定与经典文献描述相似，因此是目前公认的提取外泌体有效可靠的方法。
细胞样本：细胞样本的培养基使用量取决于细胞系以及培养状况，细胞系不同外泌体的释放量有很大差别，外泌体释放量高的细胞系几毫升培养液就足够；释放量低的则需要上百毫升。一般来说一个普通的细胞系，用超离分离外泌体，预实验（摸索条件）起始培液量50ml以上（直接正式实验建议100-500ml）。细胞培养过程中可以使用无外泌体血清培养基培养，也可以使用含有外泌体的血清培养细胞到一定密度（70-80%），然后吸去培养液，PBS洗数次之后换无血清培液进行培养（建议无血清培养48h后收集细胞上清）。
血液样本：目前认为血清中外泌体的含量还是比较高的，用促凝管或者抗凝管收集全血3000rpm 4℃ 离心10min，取上清，液氮速冻，保存于-80℃，一般需要3-5ml的血浆/血清样本。
试剂盒法：近年出现了各种用于分离纯化外泌体的商品化试剂盒，目前常用的是由SystemBiOsciences（SBI）研发的EXOQuick试剂盒，该系列的试剂是基于多聚体形式的Exosome提取试剂，形成类似于网状结果，将一定直径的微泡捕获出来，快速有效的提取各种体液样本中Exosome。