靶向Massarray 甲基化定量
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技术原理
TECHNICAL PRINCIPLE
MassARRAY EpiTYPER技术结合碱基特异性酶切(分子切割)和MALDI-TOF检测原理,可实现多重CpG sites的定量分析检测,两者的完美结合使得该技术成为高准确性、高通量及高灵敏度的DNA甲基化定量分析手段。碱基特异性酶切(MassCLEAVE)实验由亚硫酸盐处理待测 DNA 开始。经过亚硫酸盐处理,DNA中的未甲基化的胞嘧啶 (C) 转变为尿嘧啶(U),由此在 DNA 模板中产生甲基化特异的序列变化。利用 5' 末端带有T7-启动子的引物进行 PCR 扩增,产物经 SAP (虾碱性磷酸酶)处理后用于碱基特异性的酶切反应。酶切后 DNA 片段的大小和分子量取决于亚硫酸盐处理后的碱基变化,飞行质谱能测出每个片段的分子量,配套软件 EpiTYPER 则能自动报告每个相应片段的甲基化程度。