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10×Genomics单细胞表免疫组库测序

免疫组库(immune repertoire，IR)是指在任何指定时间，某个个体的循环系统中所有功能多样性B细胞和T细胞的总和。传统的免疫组库研究技术通常是用多重PCR技术或5’RACE扩增决定B细胞受体（BCR）或T细胞受体（TCR）多样性的互补决定区（CDR3区），再结合高通量测序技术实现，但往往只能检测TCR和BCR一条链的序列信息。10× Genomics的Chromium单细胞系统平台，可实现高通量的单细胞转录组和单细胞V(D)J测序。不但可以将TCR/BCR双链完美匹配，而且可以细化到单细胞水平，同时获得表达谱信息。广泛应用于肿瘤细胞异质性、免疫细胞群体检测以及胚胎发育等研究。
博淼生物提供基于10×Genomics系统单细胞免疫组库的T细胞或B细胞多样性的测序检测服务，此外也可以同时针对T细胞或B细胞中进行5‘端基因表达谱检测服务，两者数据的整合可以有效分析免疫细胞的演化及多样性的不同激活状态等深度数据分析。

技术原理

TECHNICAL PRINCIPLE

10× Genomics单细胞免疫组库测序是建立在GemCode技术上的微流体平台，将带有条形码和引物的凝胶珠与单个细胞包裹在油滴中；接下来在每个油滴内，凝胶珠溶解，细胞裂解释放mRNA，通过逆转录产生用于测序的带条形码的cDNA。液体油层破坏后，cDNA一分为二，后续同时进行基因表达和免疫组库文库构建；其中TCR或者BCR的V(D)J序列通过设计在TCR或者BCR、lg的C区域的巢式PCR引物进行富集。然后使用Illumina测序平台对文库进行测序检测，即可一次性获得大量单细胞的基因表达和免疫组库数据，实现在单细胞水平同时对基因表达和免疫组库进行研究。

    技术优势

    TECHNOLOGICAL SUPERIORITY

    开启上门技术服务

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    由于对于样本细胞活性、结团率等要求非常高，为了提升实验成功率，博淼生物开启携带10X Genomics Chromium仪器上门单细胞分选等前期实验

    不同组织样本处理条件优化

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    博淼生物联合美天旎公司，除了提供常规商业化组织细胞悬浮液制备试剂盒处理对应组织样本之外，针对其它来源组织，可以专属性的进行条件优化，进而保障最高质量的细胞悬浮液

    平台技术优势

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    样本处理周期短，从细胞悬液到测序所需cDNA文库的整个流程可在一天内完成；通量高，一次可以同时测8个样本，每个样本至多可测>10000个细胞；低double rate：1000个细胞的double rate仅0.9%；运用10×官方软件和可视化工具分析免疫细胞多样性等

    免疫组库和基因表达同时检测

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    可同时对于TCR/BCR中V(D)J进行全长检测及面细胞中的转录表达测序，两者数据的整合可以有效分析免疫细胞的演化及多样性的不同激活状态等深度数据分析。

    Illmuina测序系统的兼容

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    兼容Illumina® HiSeq®4000/2500/NextSeq®/MiSeq® 测序系统

    服务流程

    SERVICE PROCESS

    • 制备单细胞悬液

      细胞样品：免疫细胞;
      组织样品：肝脏、心脏、血管等

    • 单细胞分选

      形成GEMs
      逆转录出cDNA

    • 文库构建

      TCR文库构建
      BCR文库构建
      5’端cDNA文库构建

    • 上机测序

      小数量测序预实验评估细胞数量；
      PE150测序。

    • 数据分析

      差异基因表达分析
      t-SNE降维分析
      单细胞TCR多样性
      单细胞BCR多样性等等

    样本要求

    SAMPLE REQUIREMENTS

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