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代谢组研究服务 - 高通量靶向代谢组

 


高通量靶向核心代谢组(AQUA-600)基于LC-MS/MS技术,采用五种靶向Panel技术方法组合,通过同位素内标法实现600余种核心代谢物的绝对定量检测。



技术原理:

目前常用的有机质谱定量方法主要有外标法(External calibration)、稳定同位素内标法(Stable isotope-labeled internal standard calibration method和稳定同位素标记脂质内标单点校正法(Single-point internal standard calibration with stable isotope-labeled lipids)。以下我们将对后二者做进一步的技术解释(下图示意)。稳定同位素内标法是指先用待测物无标记标准品(一般称作外标物)配置一系列梯度分布的标准溶液,并在其中加入固定浓度的稳定同位素标记的待测物标准品(即内标),待检样本中同样加入相同的内标,然后采集标准溶液和待测样本的质谱数据,以标准溶液中外标与内标的质谱强度值的比值为自变量,以外标浓度为因变量,绘制校正曲线,然后将待测样本的外、内标质谱强度值比值代入其中,即可求解出待测物的浓度。这种质谱定量法对分析方法的技术变异较为耐受,可有效弥补质谱检测的基质效应,因此准确性很高,是公认的检测生物样本中内源性或外源性代谢物的金标准方法。但它操作繁复,测试成本高。一般而言,内标法实施时需要一对一的同位素内标,即测试A则需要有A的稳定同位素标记内标,但目前商业上大规模供给的同位素内标还是相对有限的。因此,在我们开发的高通量靶向代谢定量技术体系里,我们一方面使用了尽可能多的同位素内标,另一方面对于暂时没有一对一同位素标记内标的代谢物,我们采用化学性质与其最接近的替代内标(Surrogate internal standards)来实现内标法定量。



高通量靶向代谢组覆盖种类列表



    

600多种极性代谢物:标准品提取离子色谱图