LncRNA实时定量PCR技术
发布时间：2019-05-09 分享到：
lncRNA ( Long noncoding RNA，长链非编码 RNA ) 是一类长度超过 200 个碱基的长链非编码 RNA 分子，可在多种层面调控基因的表达。它们本身并不编码蛋白，而是以 RNA 的形式调控基因的表达。近年来研究表明，lncRNA 参与 X 染色体沉默，基因组印记以及染色质修饰，转录激活，转录干扰，核内运输等多种重要的调控过程，其调控作用开始引起人们广泛关注。
服务流程：
1. 引物设计、合成及测试
a. 从权威数据库（Refseq, UCSC known gene, ensemble, 相关文献）中得到非编码RNA的序列，屏蔽SNP及重复序列。
b. 在引物设计软件中，调整引物的设计位点，将引物设计在转录本特异的区域，如： exon-exon的连接点附近。然后根据PCR的反应条件，优化引物参数，如 Tm值，产物大小，二级结构，引物二聚体等。
c. 通过和数据库blast比对，降低引物非特异性扩展的可能性。
d. 通过实验对引物的扩增效果进行测试。
2. 样品RNA抽提及RNA质量检测
a． 紫外吸收测定法测定RNA在波长260nm和280nm的吸收值，获得RNA的浓度并通过 A260/280及A260/230的吸收比值判断RNA的纯度。
b． 甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测RNA纯度和完整性。
3. 逆转录合成cDNA
利用链特异性的反转录引物进行RT反应，合成cDNA。
4. 实时定量PCR
以合成的cDNA作为模板进行实时定量PCR扩增。同时检测每个样品中内参基因的表达量，校正上样误差。
5. 分析结果、提供实验报告
分析实时定量PCR结果，提供实验报告，包括详细的实验方法，实时定量PCR实验数据和图表。
技术优势：
· 最先进的设计软件，确保探针及引物设计的特异性
· 探针法或染料法定量分析，一切以客户需求为导向
· 探针合成委托国内最好的合成公司，确保探针质量
· 染料法采用2 -ΔΔc(t) 法，操作简便，节约时间
· 正式实验前先进行预实验，慎重对待客户的委托
· 报告详尽，数据可靠，结果真实，实验科学
样本要求：
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