circRNA实时定量PCR技术
发布时间：2019-05-09 分享到：
circRNA是目前生命科学领域新兴的研究热点分子之一。区别于传统的线性RNA，circRNA具有独特的闭合环状结构，使得其对核酸酶不敏感，所以比线性RNA更为稳定，非常适合作为临床诊断标志物（biomarker）。近期研究表明，circRNA主要通过吸附miRNA抑制后者对相应靶基因的调控，称之为竞争性内源RNA（ceRNA），而与疾病相关联miRNA的相互作用说明circRNA对疾病的调控起着非常重要的功能。
服务流程：
1. 独特的引物设计
由于circRNA独特的闭合环状结构，在进行实时定量PCR检测的时候需要更为特异的引物设计；针对circRNA特异的back splicing site，引物设计在该位点两侧（如下图），即“外向引物”（区别于线性RNA的内向引物）。
2. 样品RNA抽提
a.组织样本：取适量（50-100mg）新鲜组织或正确保存的组织样本，匀浆后用Trizol试剂抽提RNA。
b.细胞样本：取1×106-1×107细胞，PBS清洗细胞，吸去PBS后用Trizol试剂抽提RNA。
3. RNA质量检测
a.紫外线吸收测定法测定RNA在波长260nm和280nm的吸收值，获得RNA的浓度及并通过 A260/A230及A260/A280的吸收比值判定RNA的纯度；
b.甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性。
4. 逆转录合成cDNA：利用random primer进行RT反应，合成cDNA。
5. 实时定量PCR：以合成的cDNA作为模版进行实时定量PCR扩增；同时检测每个样本中内参基因的表达量，校正上样误差。
6. 分析结果、提供实验报告：分析实时定量PCR结果，提供实验报告，包括详细的实验方法、实时定量PCR实验数据和图表。
技术优势：
1引物设计独特：由于circRNA独特的闭合环状结构，在进行实时定量PCR检测的时候需要更为特异的引物设计；公司秉承独有的引物设计理念，通过巧妙识别特异位点，大幅提高检测准确性。
2 circRNA 检测效果最佳：相比于mRNA，lncRNA 的表达量较低， PCR 芯片能够完美检测低丰度 RNA。
3 品质可靠： 精心设计和反复验证的实验体系。
样本要求：
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